Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ»




НазваниеСтатья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ»
страница3/4
Дата22.09.2012
Размер2.8 Mb.
ТипСтатья
1   2   3   4

Иммунозащитные пептиды при заживлении ран


ИЗП, синтезируясь в коже в местах потенциального проникновения микробов, обеспечивают растворимый барьер, который действует как преграда для инфекций (Braff et al. 2005a,b). Если кожа не повреждена рост бактерий контролируется такими бактериостатическими и бактерицидными соединениями, как псориазин и RN-аза 7 (Schroder and Harder 2006). Однако при повреждении или инфицировании кожи экспрессия ИЗП повышается посредством увеличения синтеза кератиноцитами и отложения при дегрануляции рекрутированных нейтрофилов.

В ранах инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1) и трансформирующий фактор роста-β (TGF-β) являются стимуляторами выработки человеческого кателицидина hCAP18/LL-37 до уровня провоспалительного цитокина интерлейкина-1 (IL-1) (Sorensen et al. 2003). Оба данных фактора играют важную роль в заживлении ран активируя эпидермальные клетки и фибробласты, чтобы сформировать грануляционную ткань, выступают медиаторами ангиогенеза и хемоаттрактантами для макрофагов и фибробластов (Niyonsaba et al. 2006; Singer and Clark 1999). В рамках механизма обратной связи, кателицидин активированных лейкоцитов свиней (PR-39) оказывал прямое влияние на дермальные фибробласты путем увеличения синтеза протеогликанов внеклеточного матрикса, синдекана-1 и синдекана-4 (Chan and Gallo 1998), которые необходимы для активности многих факторов роста (Proudfoot et al. 2001). В экспериментах с животными описаны случаи задержки выработки синдекана и недостижения ранозаживляющего эффекта (Gallo 2000). Хэлиборн и др. описали постоянный рецептор-K67-зависимый рост LL-37, вырабатываемого кератиноцитами и гранулоцитами, который достигал максимума через 48 часов, и высокую экспрессию в раневых жидкостях и тканях заживающей кожи. Описано понижение экспрессии после затягивания ран и недостаток LL-37 при хронических ранах (Dorschner et al. 2001; Heilborn et al. 2003). Разные авторы писали о защитной функции LL-37 по отношению к инвазивным бактериальным кожным инфекциям, в частности к P. aeruginosa, S. aureus, и стрептококкам группы A (Dorschner et al. 2001; Ong et al. 2002). При сравнении нормальных и Cnlp-дефектных мышей (прицельное разрушение гена кателицидина) у Cnlp-дефектных мышей было отмечено замедленное заживление ран и повышенная бактериальная колонизация. (Braff et al. 2005a,b). Эти данные были подтверждены группой ученых во главе с Низе, которые сообщили о более благоприятном исходе для немутантных мышей по сравнению с Cnlp-дефектными после контрольного заражения некротизированными тканями кожи, инфицированными стрептококками группы A (Nizet et al. 2001).

Онг и др. отметили улучшенный иммунный ответ на S. aureus у пациентов, больных псориазом, благодаря высокому уровню экспрессии LL-37 , тогда как у пациентов с локальным дерматитом была отмечена пониженная экспрессия (Ong et al. 2002; Leung et al. 2004). Эти данные могут дать объяснение повышенной восприимчивости к кожным инфекциям больных с атопическим дерматитом по сравнению с больными с псориазом (Schroder and Harder 2006). Мы доказали бактерицидный эффект LL-37 на животных моделях (крысы) после кратковременной аденовирусной генной терапии ожоговых ран, инфицированных возбудителем P. aeruginosa (Jacobsen et al. 2005a,b). LL-37 оказывает прямое воздействие при заживлении ран, так как улучшает образование новых кровеносных сосудов. Кокулла и др. в своем исследовании продемонстрировали эффект LL-37 в образовании кровеносных сосудов на анализе васкуляризации хорионаллантоисной мембраны, а также на ревакуляризационной модели животного после ишемии задней конечности.

Авторы обнаружили прямое воздействие LL-37, активировав рост сосудов в культивируемых эпителиальных клетках; кроме того, было отмечено усиление кровоснабжения после инъекции LL-37 в ишемизированную конечность кролика. Ученые обнаружили непосредственное участие формильного пептидного рецептора like-1 (FPRL1) в активации hCAP-18 и последующем образовании новых сосудов. (Steinstraesser et al. 2006; Koczulla et al. 2003). Мы подтвердили ангиогенетический эффект LL-37 в эксперименте с полостью кожной складки мыши (Steinstraesser et al. 2006).

В ходе еще одного исследования анализировалась визуализация и расположение LL-37, HNPs, и hBD-1, -2, и -3 в нормальной и ожоговой коже, и с помощью флуоресцентного микроскопа были определены типы клеток, в которых локализовались данные ИЗП. Ученые доказали, что в нормальной коже hBD-1 локализируются в перинуклеарной области кератиноцитов, а hBD-2 преимущественно в базальном слое; человеческий бета-дефензин-3 был обнаружен шиповидном слое, тогда как нейтрофильные пептиды человека (HNPs) были беспорядочно рапределены в сосковидном слое. LL-37 концентрировался в роговом слое вдоль протоков.

В обожженной коже hBD-1 экспрессировался в кожных железах, в том числе в волосяных стержнях; hBD-2 и -3 были обнаружены в оставшихся кератиновых слоях и железах нижних слоев дермы; человеческие нейтрофильные пептиды локализировались в стержнях волос и остатках кератинового слоя. Интересно, что LL-37 был обнаружен в очень высокой концентрации в эпителии потовых каналов. Ученые пришли к выводу, что ИЗП продуцируются клетками нижней дермальной и субдермальной зон обожженной кожи, чтобы поддерживать защитный барьер против инфекций (Poindexter et al. 2006).

Нейтрофильные пептиды человека способствуют заживлению ран. Ooнo и др. в ходе исследования доказали, что синтез HNP-1 повышает экспрессию про-коллагена мРНК и протеинов в культурах фибробластов дермы. В противоположность этому, экспрессия матриксметаллопротеиназы-1 снизилась. Авторы предполагают, что HNP-1 может способствовать заживлению ран, увеличивая внеклеточное депонирование матрикса (Oono et al. 2002). В ходе еще одного исследования были показаны митогенетические способности нейтрофильных пептидов в линиях клеток эпителия и фибробластов in vitro (Oono et al. 2002).

Для β-дефензинов, Супп и др. установили экспрессию hBD-1, -2, и -3 в культурах кератиноцитов и расщеплённых кожных трансплантатах здоровых и обожженных доноров (Supp et al. 2004). В более поздних исследованиях отмечалось, что β-дефензины стимулируют миграцию и пролиферацию эпидермальных кератиноцитов и, таким образом, могут способствовать заживлению ран (Niyonsaba et al. 2006). Предполагается, что hBD-2 активизируется при хронических и острых язвах, поскольку в здоровой коже он не определяется (Butmarc et al. 2004).

Экспрессия hBD-3 в кератиноцитах индуцируется инфекцией S. aureus посредством TLR-2 и EGFR (Sorensen et al. 2005; Menzies and Kenoyer 2006); Кизих и др. показали, что способность кератиноцитов человека бороться с инфекциями (S. aureus) зависит от экспрессии hBD-3 в организме (Kisich et al. 2007). Мы также выяснили, что трансфер гена hBD-3 в инфицированную диабетическую язву свиньи ускоряет заживление тканей на 25% (Hirsch et al. 2009).

ИЗП гистон 1.2 оказался эффективным против раневых инфекций, вызванных P. Aeruginosa, в экспериментах с крысами – ожоги с трехкратным снижением бактериальной нагрузки (Jacobsen et al. 2005a,b). Концентрация LL-37 и hBD-1, -2, и -3 значительно снижается в травмированной ожогом коже. Тогда как hBD-1 демонстрируюет лишь умеренное понижение экспрессии в ожоговых ранах по сравнению со здоровой тканью, экспрессия hBD-2 изменяется кардинально: в ткани ожоговой раны определяется содержанин hBD-2, в 380 превышающее содержание hBD-2 в контрольном образце. Кроме этого, для hBD-3 было отмечено десятикратное увеличение мРНК-экспрессии.

Участки ткани, взятой из центра ожоговой раны, не показывают никаких прямых изменений в экспрессии LL-37 по сравнению с соответствующими участками тканей здоровых пациентов.

Однако, становится очевидным, что в пределах ожоговой раны происходит 10-кратное уменьшение экспрессии LL-37. Это может быть вызвано

G Model


IMBIO-50621; Количество страниц : 12

СТАТЬЯ В ПРЕССЕ

L. Steinstraesser et al. / Immunobiology xxx (2010) xxx–xxx 7


Таблица 1.

Плюрипотентная активность человеческого катилицидина.


Мастоцит

Хемотаксис – дегрануляция тучных клеток

Моноцит

Хемотаксис, антиэндотоксические глобальные сдвиги в генной экспрессии

Нейтрофил

Хемотаксис, ингибирует провоспалительные цитокины, повышенную антимикробную активность при апоптозе, зекрозе




Дендритическая клетка (ДК)

Способствует дифференциации ДКsl (DCsl), производных моноцитов

Плазматическая дендритическая клетка (pDC)

Индуцирует IFNa


Сосудистый эндоэпителий

Ангигенез

Кератиноцит ы

Индукция IL8, миграция клеток и заживление ран




Клетки эпителия дыхательных путей

Проапоптическая активность, индукция IL8







наличием более жизнеспособных, хотя и травмированных клеток, тогда как в центре клетки уже погибли (Kaus et al. 2008). Эти объединенные данные указывают на то, что ИЗП играют главную роль в заживлении ран и раневых инфекциях. В противоположность клинически используемым антибиотикам ИЗП имеют некоторые интересные свойства, которые позволяют применять их местно для лечения раневых инфекций и ускорения заживления ран. (Таблицы 1–3).

В заключение, иммуномодуляторные пептиды, которые в большей мере воздействуют на организм хозяина, нежели на патоген, предоставляют уникальную возможность минимизировать прямое селективное воздействие в отношении резистентности патогена. В недавнем времени было доказано, что такой иммуномодуляторный пептид как IDR-1 (регулятор врожденного иммунитета), защищает мышей от бактериальных инфекций, включая инфекции, вызванные мультирезистнтными штаммами, и это предоставляет собой



Таблица 2

Иммуномодуляторные свойства иммунозащитных пептидов млекопитающих


Тип клеток или ткани



Выработка иммунозащитных пептидов и их свойства

Гемопоэтические клетки

Нейтрофилы (Nagaoka et al. 2008; Zheng et al. 2007)

Тучные клетки (Bahri et al. 2010; Di Nardo et al. 2008; von Kockritz-Blickwede et al. 2008)


Моноциты и макрофаги (Elssner et al. 2004;

Soehnlein et al. 2009; Yu et al. 2007

Миелоидные дендритные клетки (Bandholtz et al. 2006; Kandler et al. 2006; Morioka et al. 2008)


Плазмоцитоидные дендритные клетки (Ganguly et al. 2009; Lande et al. 2007)


Эпителиальные клетки

Кератиноциты (Coffelt et al. 2009; Tokumaru et al. 2005; Yahata et al. 2006; Yamasaki et al. 2007)


Бронхиальный эпителий (Barlow et al. 2010;

Tjabringa et al. 2003)

Интестинальный эпителий (Otte et al. 2009; Wehkamp et al. 2007)


Другие клетки

Сосудистый эндотелий (Steinstraesser et al. 2009; Shaykhiev et al. 2005)

Мезенхимальные стромальные клетки (Coffelt et al. 2009)


Опухолевые клетки (von Haussen et al. 2008; Chuang et al. 2009)


Пептиды LL-37 и дефензины вырабатываются нейтрофилами и затем депонируются в нейтрофильных гранулах. LL-37 является нейтрофильным хемоаттрактантом, ингибирует нейтрофильный апоптоз и способствует антимикробной функции нейтрофилов, индукции хемокинов, но подавляет активность провоспалительных цитокинов.

Тучные клетки вырабатывают LL-37 в коже. LL-37 и β- дефензины являются хемоаттрактантами моноцитов и способствуют их дегрануляции.

В in vitro и in vivo исследованиях было выявлено, что LL-37 и β- дефензины являются хемоаттрактантами моноцитов. LL-37 обладает антиэндотоксичным действием и способствует выработке хемокинов, а также секреции интерлейкина 1-b (IL1-b). Однако, в то же время LL-37 подавляет воспалительный ответ на некоторые TLR лиганды (лиганды, связывающиеся с толл - подобными рецепторами).

Дефензины и кателицидины являются хемоаттрактантами дендритных клеток (ДК). LL-37 стимулирует дифференциацию моноцит - производных дендритных клеток, но подавляет их созревание и активацию TLR лигандами.

β-дефензин 2 может вызвать активацию дендритных клеток в качестве эндогенного TLR4 лиганда. Вспомогательная роль дефензинов и кателицидинов in vivo может быть частично опосредована их активностью по отношению к дендритным клеткам.

LL-37 в сочетании с ДНК - олигонуклеотидами значительно повышает выработку интерферона плазмоцитоидными дендритными клетками. Это может играть роль в такой патологии как псориаз.


LL-37 может способствовать миграции кератиноцитов и увеличению выработки интерлейкина-8 (IL8). Кроме того, LL-37 ингибирует апоптоз кератиноцитов и модулирует иммунный ответ на TLR лиганды. Это оказывает благоприятное влияние на заживляющие процессы в коже. Изменение протеолитического процессинга человеческого катионного антимикробного белка (hCAP18) и белка LL-37 играет роль при патологии розацеа.

В клетках бронхиального эпителия LL-37 стимулирует выработку цитокинов и хемокинов и способствует апоптозу.


α-Дефензины вырабатываются клетками Панета. LL-37 способствует выработке муцина и поддержанию обменных процессов в клетках интестинального эпителия. LL-37 играет важную роль в иммунной защите кишечника. Сниженная выработка α-дефензина может способствовать развитию болезни Крона.


LL-37 индуцирует активацию и пролиферацию сосудистого эндотелия и способствует ангиогенезу.


LL-37 является хемокином мезенхимальных стромальных клеток и способствует выработке различных цитокинов, а также сосудистого эндотолиального фактора роста (VEGF) и матриксной металлопротеиназы 2 (MMP2); это способствует ангиогенеза и прогрессированию опухоли.

LL-37 способствует миграции и пролиферации опухолевых клеток легких, яичников и молочных желез, а выработка LL-37 раковыми клетками in vivo способствует росту опухоли. Впрочем, LL-37 также увеличивает антираковую терапевтическую активность ЦфГ (CpG) олигонуклеотидов.

Просим давать следующую ссылку на данную статью в прессе: Steinstraesser, L., et al., Host defense peptides and their antimicrobial-immunomodulatory duality. Immuno-biology (2010), doi:10.1016/j.imbio.2010.07.003

G Model


IMBIO-50621; Количество страниц : 12

СТАТЬЯ В ПРЕССЕ

8 L. Steinstraesser et al. / Immunobiology xxx (2010) xxx–xxx

Таблица 3

Иммунозащитные пептиды – коммерческие разаработки.


Лекарственный препарат

Описание

Этап разработки

Показания к использованию в медицине

Иммунозащитные пептиды с противоинфекционным и антимикробным действием

Человеческий лактоферрин hLF-1-11 (производитель: AM-Pharma


Омиганана пентагидрохлорид/CP-226

(MX-226/CLS001; производитель:Migenix))


Омпебакан (Ompebacan (производитель:Xoma))


Мерзацидин (Mersacidin)


BL2060


Катионный стероидный антибиотик CSA-13


Плектацин (Plectasin)


PTX002 (состоящий из 33 аминокислотных остатков пептид), PTX005 (состоящий из 12 аминокислотных остатков пептид), PTX006 (N-ацилированный аналог PTX005) и PTX007 (непептидный структурный аналог PTX005)


Пептидомиметик


Бактерицидный протеин, увеличивающий проницаемость мембран rBPI21


XOMA 629 (производитель:Xoma)

Короткий пептид. Является производным человеческого лактоферрина


Синтетический иммунозащитный пептид, состоящий из 12 аминокислотных остатков. Является аналогом бактолизина, производным индолицидина


Пептид, состоящий из 21 аминокислотного остатка. Является производным бактерицидного протеина, увеличивающего проницаемость мембран


Бактериоцин


Синтетическое соединение, содержащее жирные кислоты и сополимеры лизина


Катионный стероидный лекарственный препарат (церагенин), имитирует свойства иммунозащитных пептидов


Фунгальный дефензин


Производное ариламидов, каликсаренов, гидразидов и салициламидов


Пептид, состоящий из 9 аминокислотных остатков. Является производным бактерицидного протеина, увеличивающего проницаемость мембран



Клинические исследования. Фаза II


Клинические исследования. Фаза 3b


Клинические исследования. Фаза I/II


Доклинические исследования.


Оптимизация состава лекарственного препарата


Доклинические исследования.


Доклинические исследования.


Открытие.


Стадия разработки/доклинические исследования


Клинические исследования. Фаза IIIb


Клинические исследования. Фаза IIa

Инфекционные заболевания, развивающиеся в связи с аллогенной трансплантацией стволовых клеток костного мозга


Профилактика катетер - ассоциированных инфекционных заболеваний; кожные инфекционные заболевания


Эндотоксемия у больных после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток


Заболевания, вызванные грамположительными микроорганизмами


Противоинфекционное действие


Противоинфекционное действие


Лекарственный препарат для системного применения. Активен по отношению к грамположительным микроорганизмам, особенно к пневмококкам и стрептококкам


Лекарственный препарат широкого спектра, обладающий антимикробным и антиэндотоксиновым действием


Противоинфекционное действие; упаковочный материал обладает антимикробными свойствами


Противоинфекционное действие; инфекционные заболевания, развивающиеся в связи с аллогенной трансплантацией стволовых клеток костного мозга; профилактика инфекционных заболеваний послеожоговых ран

Противоинфекционное действие. Импетиго



Иммунозащитные пептиды c противоинфекционным действием, однако, недостаточными антимикробными свойствами

EA-230 (производитель: Exponential Biotherapies)


Глутоксим/NOV-002 (производитель:Pharma BAM/Noveios)


IMX942 (производитель: Inimex)

Олигопептидный фрагмент хорионического гонадотропина человека (β –ХГЧ, β-hCG) (ХГЧ - ассоциированный пептид LQGV, состоящий из 4 остатков аминокислот)

Гексапептид со стабилизированной дисульфидной связью


Пептид, состоящий из 5 аминокислотных остатков. Является производным IDR-1 и индолицидина

Клинические исследования. Фаза II (Россия)


Клинические исследования. Фаза II (Северная Америка)


Клинические исследования. Фаза IA


Сепсис


Туберкулез, немелкоклеточный рак легкого


Иммуномодуляторное действие; лечение лихорадки и нейтропении у больных, проходящих химиотерапию

Иммуномодуляторные пептиды

DiaPep277 (производитель: DeveloGen)


RDP58 (производитель: Genzyme)

Белок теплового шока HSP60, производный бактерицидного/ увеличивающего проницаемость мембран белка


Полусинтетический декапептид, состоящий из D- аминокислотных остатков. Является производным человеческого лейкоцитарного антигена HLA класса I B2702

Клинические исследования. Фаза IIA


Клинические исследования. Фаза II завершена

Сахарный диабет 1 типа


Воспалительные заболевания кишечника

Иммунозащитные противоинфекционные пептиды с неизвестной иммуномодуляторной активностью

Пексиганана ацетат (Pexiganan acetate (MSI-78))


PAC113 (производитель: Pacgen Biopharmaceuticals)


CZEN-002


HB-50


MBI 594AN


HB-107


PMX-30063 (производитель: PolyMedix)


HB-1345 (производитель: Helix BioMedix)


Изеганан (Iseganan (IB-367; производитель: Ardea Biosciences))

Синтетический иммунозащитный пептид, состоящий из 22 остатков аминокислот. Является производным магаинина (magainin)


Белок, состоящий из 12 аминокислот. Синтезирован на основе активного компонента гистатина 5, обнаруженного в человеческой слюне


Синтетический пептид, состоящий из 8 аминоксилотных остатков. Является производным меланоцит-стимулирующего гормона


Синтетический натуральный пептид. Имитирует свойства цекропину


Фрагмент цекропина B, состоящий из 19 аминокислотных остатков


По структуре имитирует дефензин. Низкомолекулярный сополимер непептидной природы


Липопептид, состоящий из 6 остатков аминокислот


Синтетическое производное протегрина-1, состоящее из 17 аминокислотных остатков

Клинические исследования. Фаза IIII


Клинические исследования. Фаза II


Клинические исследования. Фаза IIB


Доклинические исследования


Доклинические исследования


Доклинические исследования


Клинические исследования. Фаза IB


Клинические исследования. Предстоит Фаза I


Клинические исследования. Фаза III

Противоинфекционное, ранозаживляющее действие. Является антибиотиком местного действия


Кандидоз ротовой полости


Вульвовагинальный кандидоз


Противоинфекционное действие


Противоинфекционное действие


Заживление ран


Антибиотик


Акне


Мукозит ротовой полости у больных, проходящих радиотерапию



С изменениями по Steinstraesser et al. (2009).


серьезное доказательство принципа иммуномодуляторного подхода. Оказалось, что пептид выступал в роли хемоаттрактанта нейтрофилов и впоследствии индуцировал выработку хемокина, способствовал рекрутированию клеток in vitro и in vivo; возможно, эти особенности объясняют некоторые из защитных свойств пептидов. Важно, что IDR-1, как и многие природные нейтрофильные пептиды человека, оказывает противовоспалительное и антиэндотоксиновое воздействие одновременно со своими противомикробными функциями.

1   2   3   4

Похожие:

Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ» iconДипломы по экономике и менеджменту
Разработан отделом по управлению качеством и стандартизации ОАО «xxx» (отдел XXX)
Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ» iconДипломы по экономике и менеджменту
Разработан отделом по управлению качеством и стандартизации (отдел XXX) ОАО «xxx»
Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ» iconПрограмма XXX научной конференции судентов, магистрантов, аспирантов и учащихся лицейных классов
Порядок работы секций XXX научной конференции студентов, магистрантов, аспирантов и учащихся лицейных классов (24 апреля 2003 г)
Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ» iconНазвание научного
Тезисы докладов XXX совещания по ядерной спектроскопии и структуре атомного ядра. Ленинград, 1980, с. 209
Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ» icon152: 481-xxx. Abughrien, B. M., Dore, M. A. 2000. Ciliogenesis in the uterine tube of control and superovulated heifers. Cells, Tissues Organs 166

Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ» iconФестиваль завершится 4 июня 2011 года
Тамбовской области открылся юбилейный XXX междуна­родный музыкальный фестиваль им. С. В. Рахманинова
Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ» iconАкты Виленской археографической комиссии
Акты Виленской археографической комиссии: Том XXX акты Трокского подкоморского суда за 1585-1613 годы / М.: Книга по Требованию,...
Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ» iconОтчет по результатам диагностики системы управления персоналом ОАО " XXX "
Охватывает не только формы материального стимулирования, но и вообще любые отношения администрации и трудового коллектива. Поэтому...
Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ» iconРешение от 23 апреля 2009 г. N xxvi/xxix-593
Совета в ред. Решений от 18. 04. 2001 n xxiv/X-187, от 02. 10. 2001 n xxiv/xiii-257, от 11. 09. 2002 n xxiv/xxviii-366, от 17. 12....
Статья в прессе иммунология XXX (2010) XXX-XXX Содержание можно просмотреть на «Сайенс Директ» icon1 апреля- день смеха. Начало 4 четверти
График мероприятий на каникулах можно просмотреть в разделе "воспитательная работа"
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©lib.znate.ru 2014
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница