Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка




НазваниеРабота № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка
страница1/3
Дата20.01.2013
Размер324 Kb.
ТипДокументы
  1   2   3
ХИМИЧЕСКАЯ ПРИРОДА БЕЛКА

Работа № 1. БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ ПИОТРОВСКОГО

В первую пробирку наливают 5 капель 5 % раствора яичного белка, во вторую - 5 капель 5 % раствора пшеничного белка, в третью -5 капель 5 % раствора желатина. Во все три пробирки приливают по 5 капель 10 % раствора едкого натра и по 1 капле 1 % раствора серно­кислой меди. Во всех пробирках раствор приобретает устойчивую красно-фиолетовую (сине-фиолетовую) окраску.

Работа № 2. НИНГИДРИНОВАЯ РЕАКЦИЯ

В первую пробирку наливают 5 капель 1 % раствора яичного белка, во вторую - 5 капель I % раствора пшеничного белка. В каждую пробирку прибавляют по 2-3 капли 0,1 % раствора нингидрина и кипя­тят. Через 1-2 минуты содержимое пробирок окрашивается в розовый, красный, а затем в синий цвет. При стоянии интенсивность окраски увеличивается.

Работа № 3. КСАНТОПРОТЕИНОВАЯ РЕАКЦИЯ НА

АРОМАТИЧЕСКИЕ АМИНОКИСЛОТЫ

В первую пробирку наливают 5 капель 1 % раствора яичного белка, во вторую - 5 капель 1 % раствора пшеничного белка, в третью -5 капель 1 % раствора желатина. Во все пробирки добавляют по 2-3 капли концентрированной азотной кислоты и нагревают. В первой и второй пробирках жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет, в третьей наблюдается едва заметное бледно-желтое окрашивание. По­сле охлаждения в каждую пробирку добавляют по 10 капель концен­трированного раствора аммиака или 30 % раствор едкого натра. Окра­ска жидкости переходит в оранжевую, так как образуется аммонийная соль динидротирозина хиноидной структуры.

Работа № 4. РЕАКЦИЯ МИЛЛОНА ПА ТИРОЗИН

Работу проводить под тягой!

В пробирку с 1 мл раствора фенола добавляют 0,5 мл реактива Миллона (свежий раствор HgNO3 в HNO3) и осторожно нагревают. Появляется розовая окраска. В другую пробирку наливают 1-2 мл рас­твора яичного или растительного белка и 5-6 капель реактива Миллона, осторожно нагревают. Жидкость окрашивается в красный цвет, а затем выпадает осадок коричнево-красного цвета. То же проделывают с раствором желатина. Красного окрашивания не происходит или оно проявляется очень слабо, если желатин не очищен от примеси других белков.

Положительная реакция белка с реактивом Миллона свидетельст­вует о наличии в составе белка тирозина. По реакция не специфична и протекает также с фенолом. Проба с желатином отрицательна, так как в составе этого белка нет тирозина.

Работа № 5. РЕАКЦИЯ НА ТРИПТОФАН

В первую пробирку наливают 5 капель I % раствора яичного белка, во вторую - 5 капель 1 % раствора пшеничного белка, в третью - 5 капель 1 % раствора желатина. Во все пробирки добавляют по 5 капель концен­трированной уксусной кислоты, слегка нагревают и добавляют равный объем концентрированной серной кислоты. В первых двух пробирках с раствором яичного и пшеничного белка на границе двух фаз появляется красно-фиолетовое кольцо, постепенно распространяющееся на всю жид­кость. При нагревании на кипящей водяной бане окрашивание происхо­дит быстрее. В пробирке с раствором желатина реакция отрицательная, так как в желатине нет триптофана.

Работа № 6. РЕАКЦИЯ ФОЛЯ НА СЕРУСОДЕРЖАЩИЕ АМИНОКИСЛОТЫ

В первую пробирку наливают 2 мл раствора яичного или расти­тельного белка, во вторую - столько же раствора желатина. В обе пробир­ки добавляют по 1-1,5 мл раствора щелочи и осторожно нагревают до ки­пения и кипятят 1-2 минуты. После этого в каждую пробирку прибавляют по 2-3 капли раствора уксуснокислого свинца.

В пробирке с яичным или растительным белком появляется буро­вато-черное или черное окрашивание, интенсивность которого зависит от концентрации раствора белка и содержания в нем цистеина и метионина. Раствор желатина не дает окрашивания.

Буровато-черное или черное окрашивание свидетельствует о нали­чии в составе белка цистеина или метионина. Желатин этих аминокислот не содержит.

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БЕЛКА

Работа № 7. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ

Вырезают полоску фильтровальной бумаги длиной 12 см, шириной 1,5 см. Через верхний конец полоски протягивают нитку длиной 15 см и завязывают её узлом. На нижнем конце бумаги на расстоянии 1см от края наносят карандашом кружок диаметром 3-4 мм. В середину кружка при помощи капилляра наносят маленькую каплю исследуемого раствора смеси аминокислот. Место, где была нанесена капля раствора, подсуши-

вают на воздухе или на хроматографическом столике.

На дно пробирки длиной 18-20 см, диаметром 2 см осторожно, не смачивая стенок, наливают из пипетки 15-20 капель элюента - бу-танола, насыщенного водой. Приготовленную ранее бумажную полос­ку устанавливают в пробирке, придерживая за нитку, так чтобы она погрузилась в жидкость на 2-3 мм и висела вертикально, не касаясь стенок. Пробирку закрывают пробкой. За 1,5-2 часа фронт растворите­ля поднимется на 10-12 см. После этого полоску вынимают из пробир­ки за нитку и подвешивают её в вертикальном положении в сушильном шкафу, нагретом до 105°С.

После испарения растворителя бумажную полоску вынимают из сушильного шкафа и обрабатывают раствором нингидрина, затем сно­ва помещают в сушильный шкаф на 5-6 минут. При этом в местах при­сутствия аминокислот появляются линии или пятна синего или фиоле­тового цвета.

Линейкой измеряют на бумажной полоске расстояния:

а) от места нанесения капли исследуемого раствора до середины
каждого пятна;

б) от места нанесения капли исследуемого раствора до фронта
растворителя.

По полученным данным вычисляют коэффициент распределения отдельных аминокислот.

Работа № 8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ ТОЧКИ БЕЛКА

В пять пробирок наливают 0,2 М раствор уксусной кислоты и 0,2 М раствор уксуснокислого натрия в количествах, указанных в таб­лице. В каждую пробирку к 1 мл полученной смеси приливают по 0,5 мл 1 % раствора желатина или яичного белка и по 2 мл этанола. Отмечают, в какой пробирке и при каком значении рН произошло наи­большее помутнение раствора. Отсутствие мути отмечают знаком "-", а его наличие одним или двумя знаками " + ". Результаты фиксируют в таблице и по степени мутности делают вывод об изоэлектрической точке данного белка.

Таблица Определение изоэлектрической точки белка






Раствор CH3COONa, мл

Раствор СН3СООН. мл

рН

Помутнение

1

0,1

0,9

3.80




2

0,2

0,8

4,15






3

0,5

0,5

4,75

4

0,8

0,2

5,35

5

0,9

0,1

5,70

Работа № 9. РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВЫХ ФРАКЦИЙ МЕТОДОМ ВЫСАЛИВАНИЯ

К 10 каплям солевого раствора яичного белка приливают 10 капель полунасыщенного раствора сернокислого аммония. При этом выпадает осадок яичного глобулина. Через 5 минут осадок отфильтровывают и к фильтрату добавляют истолченный порошок сернокислого аммония до прекращения растворения соли, т.е. до полного насыщения. Образуется осадок яичного альбумина, который всплывает наверх из-за высокой плотности жидкости. Результаты работы фиксируют в таблице.

Таблица Осаждение белков высаливанием



Наименование белка

Используемые соли

Степень насыще­ния

Образование осадка













Работа № 10. ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКА ОРГАНИЧЕСКИМИ РАСТВОРИТЕЛЯМИ

К 5 каплям яичного или пшеничного белка прибавляют 1 мл 96 % этанола или ацетона. Раствор мутнеет. Добавляют 1 каплю насыщенного раствора хлористого натрия. При стоянии выпадает осадок белка. Резуль­таты работы по осаждению белка различными реактивами фиксируют в таблице.

Таблица Реакция осаждения белка



Тип веществ, оса­ждающих белки

Используемые реактивы

Характер и цвет осадка

Чем обусловлена реак­ция и ее особенности

1. Органические растворители










2. Конц. мине­ральные кисло-










3. Органические кислоты










4. Соли тяжелых металлов










Работа №11. ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКА КОНЦЕНТРИРОВАННЫМИ МИНЕРАЛЬНЫМИ КИСЛОТАМИ

В пробирку наливают 5 капель концентрированной азотной кислоты и, наклонив её под углом 45°, осторожно по стенке пробирки приливают равный объем 1 % раствора белка. На границе двух фаз об­разуется осадок белка в виде тонкой пленки. То же проделать с серной и соляной кислотами.

Работа № 12. ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКА ОРГАНИЧЕСКИМИ

КИСЛОТАМИ

К 5 каплям 1 % раствора белка добавляют 1-2 капли 10 % рас­твора сульфосалициловой кислоты. Выпадает осадок белка. То же про­делывают с трихлоруксусной кислотой.

Работа № 13. ОСАЖДЕНИЕ БЕЛКА СОЛЯМИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ

1.К 5 каплям 1 % раствора яичного или пшеничного белка при­ливают 1 каплю 5 % раствора уксуснокислого свинца или 7 % раствор сернокислой меди. Выпадает осадок белка. К другой такой же порции раствора белка прибавляют вначале одну каплю соли тяжелого метал­ла, а затем ещё 5-10 капель и наблюдают за растворением осадка (пеп-тизация).

2.К 5 каплям I % раствора белка прибавляют 1 каплю 5 % рас­твора азотнокислого серебра, получают осадок, который не растворя­ется в избытке реактива (в отличие от других солей тяжелых метал­лов). При очень малой концентрации белка осаждения солями тяжелых металлов может не произойти, так как ионы металлов могут оказаться в избытке и произвести пептизацию.

СЛОЖНЫЕ БЕЛКИ

Работа№ 14. ГИДРОЛИЗ НУКЛЕОПРОТЕИНОВ ДРОЖЖЕЙ

В коническую колбу помещают 1 г пекарских дрожжей и зали­вают 15 мл 10 % раствора серной кислоты. Колбу закрывают пробкой, в которую вставлена в качестве холодильника стеклянная трубка дли­ной 25-30 см, взбалтывают и кипятят. Через I час нагрев прекращают, охлаждают и фильтруют. В фильтрате открывают продукты гидролиза нуклеопротеинов полипептиды, пуриновые основания, рибозу, фос­форную кислоту соответствующими качественными реакциями.

а). Биуретовая реакция на полипептиды. К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10 % раствора едкого натра и 1-2 капли 1 % рас­твора медного купороса до появления красно-фиолетового окрашива­ния, что свидетельствует о присутствии в пробе полипептидов - про

дуктов гидролиза белковой части нуклеопротеинов.

б). Серебряная проба на пуриновые основания. 10 Капель гидроли-зата нейтрализуют 1 каплей концентрированного аммиака и добавляют 5 капель 1 % раствора азотнокислого серебра. При стоянии через 3-5 минут выпадает немного рыхлого осадка серебряных соединений пуриновых оснований (аденина, гуанина), окрашенного в бурый цвет.

в). Проба Троммера на рибозу и дезоксирибозу. К 5 каплям гидро-лизата добавляют 10 капель 30 % раствора едкого натра и 5-10 капель 7 % раствора сернокислой меди до появления неисчезающей мути гидроокиси меди. Жидкость перемешивают и её верхний слой нагревают до начала кипения. Выпадает красный или желтый осадок гидрата закиси меди, об­разующийся вследствие окисления рибозы и восстановления гидрата оки­си меди до закиси.

г). Молибденовая проба на фосфорную кислоту. К 10 каплям мо­либденового реактива (раствор молибденовокислого аммония в азотной кислоте) добавляют 5 капель гидролизата и кипятят несколько минут на открытом огне. В присутствии фосфорной кислоты жидкость окрашива­ется в лимонно-желтый цвет. При охлаждении выпадает желтый осадок комплексного соединения фосфорномолибденового кислого аммония.

Работа № 15. ФОСФОПРОТЕИНЫ. ВЫПАДЕНИЕ КАЗЕИНА ИЗ МОЛОКА

К 10 мл молока прибавляют равный объем дистиллированной воды и осаждают казеин добавлением 10 капель 10 % раствора уксусной кисло­ты. Казеин выделяется в виде хлопьевидного осадка, который отфильтро­вывают и 2-3 раза промывают на фильтре дистиллированной водой.

Работа № 16. ГИДРОЛИЗ КАЗЕИНА И ОТКРЫТИЕ В

ГИДРОЛИЗАТЕ ФОСФОРНОЙ КИСЛОТОЙ

В 3 мл 10 % раствора едкого натра растворяют в пробирке 3/4 осад­ка казеина (работа № 15). Пробирку закрывают пробкой со стеклянной трубкой в качестве холодильника и кипятят в течение часа. После охлаж­дения нейтрализуют 12-15 каплями азотной кислоты до слабо кислой ре­акции на лакмус. При нейтрализации выпадает осадок высокомолекуляр­ных продуктов частичного гидролиза белка-альбумозы и пептоны. После отстаивания жидкость фильтруют и с фильтратом проделывают молибде­новую пробу на фосфорную кислоту (работа № 14 г). Для выявления бел­ковой части фосфопротеинов проделывают биуретовую реакцию (работа № 14 а).

Работа № 17. ГЛИКОПРОТНИНЫ. ВЫДЕЛЕНИЕ МУЦИНА ИЗ СЛЮНЫ

В пробирку собирают около 2 мл слюны и по каплям (4-5 ка­пель) прибавляют концентрированную уксусную кислоту. Выделяется осадок муцина, малорастворимый в избытке уксусной кислоты. Сгу­сток вынимают стеклянной палочкой, помещают в чистую пробирку и проделывают с ним биуретовую реакцию (работа № 14 а).

Работа № 18. НАФТОЛОВАЯ ПРОБА НА УГЛЕВОДНУЮ ГРУППИРОВКУ МУЦИНА. РЕАКЦИЯ ПОДОБЕДОВА

К сгустку муцина (работа № 17) добавляют 1-2 капли 1 % спир­тового раствора а-нафтола, перемешивают и по стенке осторожно при­ливают равный объем концентрированной серной кислоты. На границе раздела фаз появляется фиолетово-красное кольцо, хорошо заметное на белом фоне. Если вместо а-нафтола использовать 1 % раствор тимола, то образуется более отчетливое красное кольцо.

Работа № 19. СПЕЦИФИЧЕСКАЯ РЕАКЦИЯ НА ГЕМ ГЕМОГЛОБИНА

Каплю свежей крови помещают на предметное стекло и дают ей высохнуть на воздухе. К подсушенной крови добавляют 1-2 капли концентрированной уксусной кислоты, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, покрывают покровным стеклом и осторожно нагревают до начала кипения (не кипятить!). При этом предметное стекло следует держать высоко над пламенем горелки, чтобы избежать выкипания жидкости. Затем препарат охлаждают и рассматривают под микроскопом образовавшиеся при разрушении гемоглобина кристаллы солянокислого гемина, имеющие форму ромбоидальных палочек.

Если обнаружить кристаллы не удается, то приподнимают по­кровное стекло, добавляют 2-3 капли концентрированной уксусной кислоты, нагревают и после охлаждения вновь исследуют под микро­скопом.

  1   2   3

Похожие:

Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка iconКурсовая работа по биоинформатике. Тема : идентификация белка
Тема : идентификация белка, исследование его аминокислотной последовательности и построение филогенетического древа гомологов
Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка iconПроизводство работ
Расчет требуемой прочности бетона и раствора должен выполняться проектной организацией, осуществляющей разработку или привязку проекта....
Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка iconПеречень практических и лабораторных занятий осеннего семестра (2 курса)
...
Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка iconЗачет №1 Часть А
Белки являются одним из важнейших компонентов пищи. В основе усвоения белка в желудочно-кишечном тракте лежит реакция
Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка iconСтруктура и функции белков
Первичная, вторичная, третичная, четвертичная структура белка. Глобулярные, фибриллярные и мембранные белки. Понятие о биосинтезе...
Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка iconПеречень практических и лабораторных занятий весеннего семестра (1 курса) для студентов, обучающихся по специальности «Стоматология»
Биохимия белка-I. Вводное. Правила техники безопасности. Строение аминокислот. Строение белковой молекулы (исследование белка)
Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка iconПоиск гомологов красного флуоресцентного белка из Discosoma sp. (DsRed). Установление консервативных аминокислотных остатков у различных групп гомологов. Выяснение значения найденных остатков для структуры и функций белка

Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка iconА. В. Финкельштейн Программа курса лекций для студентов мгу: биологического факультета
Первичная, вторичная, третичная, четвертичная структура белка. Глобулярные, фибриллярные и мембранные белки. Понятие о биосинтезе...
Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка iconИсходный файл "Новости", стс-прима "Новости", стс-прима, 28. 11. 2011
Напомним, Squirrel или u-белка была принята в качестве неформального студенческого символа в конце 2010 года. "U" — умная, шустрая,...
Работа № биуретовая реакция пиотровского в первую пробирку наливают 5 капель 5 раствора яичного белка, во вторую 5 капель 5 раствора пшеничного белка iconКурсовая работа
Определение области контакта рибосомального белка S7 с 16S ррнк в структуре Tth30S
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©lib.znate.ru 2014
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница