Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля




НазваниеЭкспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля
страница1/7
Дата01.01.2013
Размер0.78 Mb.
ТипАвтореферат
  1   2   3   4   5   6   7



На правах рукописи


КОСЕНКО ЮРИЙ МИХАЙЛОВИЧ


ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ЦИМИНАЛЯ


16.00.04 – ветеринарная фармакология с токсикологией

03.00.04 – биохимия


АВТОРЕФЕРАТ


диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук


Воронеж - 2009



Работа выполнена в отделе клинической биохимии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН.


Научные консультанты: доктор ветеринарных наук, профессор

Шабунин Сергей Викторович

доктор биологических наук

Востроилова Галина Анатольевна


Официальные оппоненты: Заслуженный деятель науки РФ, доктор

биологических наук, профессор

Бузлама Виталий Соломонович

доктор ветеринарных наук, профессор
Мерзленко Ольга Валерьевна


доктор биологических наук, профессор

Шапошников Андрей Александрович


Ведущая организация: ФГОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная
академия ветеринарной медицины




Защита состоится «10» декабря 2009 года в 10 часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.01 при Всероссийском научно-исследо-вательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии РАСХН (394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114б).


Автореферат разослан «__» __________200_ г.


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ.


Ученый секретарь

диссертационного совета, к.биол.н., доцент Т.И. Ермакова


1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Снижение эффективности химиотерапии и химиопрофилактики, наблюдаемое в различных областях инфекционной патологии человека и животных, объясняется, прежде всего, селекцией лекарственно-устойчивых, полирезистентных форм возбудителей, обусловленной более чем полувековым применением антибиотиков, нарастающими явлениями иммунодепрессии и иммунодефицитов у восприимчивых организмов (Г.И. Истомина с соавт., 1990; А.А. Адарченко с соавт., 1991; А.А. Буяков, 1993; Ю.Н. Федоров с соавт., 1996; А.Г. Шахов с соавт., 2000, 2003; Л.Е. Бояринцев, 2003). Сложившаяся ситуация усугубляется резко возросшей ролью ассоциированных инфекций, L-трансформацией многих видов бактерий, отсутствием средств и методов иммунопрофилактики и иммунотерапии при ряде заболеваний (В.А.Мищенко с соавт., 2002; О.П. Татарчук., 2004; О.В. Распутина, 2007). Следствием этого стало преобладание в этологии многих болезней более устойчивых форм и видов возбудителей (Н.А. Шкиль с соавт., 2003; Ю.Г. Попов, 2004; Г.Н. Кузьмин, 2006; А.Г. Шахов, 2008).

Развивающиеся патологические процессы характеризуются нарушением обмена веществ, снижением локального и общего иммунного статуса животных, активацией свободнорадикальных механизмов и перекисного окисления липидов, развитием интоксикационных процессов (А.Г. Нежданов, 2005; Н.И. Полянцев с соавт., 2006; М.И. Рецкий с соавт., 2008).

Актуальность проблемы терапии инфекционных болезней, вызванных полирезистентными штаммами бактерий, не вызывает сомнения. Возможными путями решения этой проблемы может явиться либо синтез новых антибактериальных средств, либо оптимизация применения уже имеющихся препаратов. Обусловленным является поиск новых фармакологических субстанций, обладающих антимикробными свойствами широкого спектра действия против микроорганизмов с минимальными побочными эффектами и выгодными токсикогенными характеристиками. Кроме этого лекарственные средства необходимо разрабатывать с учетом механизмов патогенеза болезни. Компоненты препарата должны сочетать многосторонний фармакологический эффект и этиопатогенетическую направленность.

Относительно новым и перспективным направлением в разработке новых препаратов для терапии инфекционных болезней являются препараты неантибиотической природы, как, например, соли четвертичных аммониевых соединений, гуанидиновой кислоты и др. (В.И. Стручков с соавт., 1991; М.И. Кузин, 1990; М.М. Астраханова, 1997; С.Ф. Антонов, 1999; К.В. Алексеев с соавт., 2000; В.В. Бобкин, 1999; А.Г. Миляновский, 2000; Ю.Г. Попов, 2003; D.R. Harris, 1994).

Несмотря на значительные успехи ветеринарной фармации, выбор субстанций с указанными свойствами ограничен, а их применение не обеспечивает должный лечебно-профилактический эффект.

Указанными свойствами, в частности, обладает циминаль – пара-нитро-α-хлоркоричный альдегид, используемый в медицине в составе препаратов цимезоль и цидипол для лечения и профилактики гнойных осложнений при повреждении мягких тканей, для профилактики и лечения болезней мочеполовых путей, вызванных трепонемами, гонококками, трихомонадами. В ветеринарии указанная субстанция имеет ограниченное применение (М.Д. Машковский, 1994-2008).

В тоже время производители сельскохозяйственной продукции, использующие в соответствии со своим технологическим регламентом антибиотики, пестициды и стимуляторы роста, должны гарантировать безопасность продукции для здоровья человека. Для этого остаточное содержание этих потенциально опасных химических соединений в готовой продукции должно быть ниже предельно допустимых уровней, определенных законодательством.

Разработка и утверждение гигиенических критериев для лекарственных веществ, применяемых в ветеринарной практике, должно сопровождаться разработкой соответствующей правовой базы для обеспечения контроля за качеством продукции животноводства. Контроль за остаточными количествами действующих веществ в продуктах животноводства является специфической задачей ветеринарной службы, требующей для своего решения значительных материальных затрат и высококвалифицированных кадров (О.И. Кальницкая, 2005; І.Я. Коцюмбас с соавт., 2007).

Новый технологический подход расширяет перечень лекарственных препаратов с использованием в качестве исходного сырья циминаля (пара-нитро--хлоркоричного альдегида). Однако практически нет сведений по экспериментальной и клинической фармакологии препаратов, получаемых с использованием циминаля и эффективности применения таких препаратов в ветеринарной медицине.

С учетом выше изложенного, были определены направленность исследований, их методическое и материальное обеспечение, объем, разнообразие, широта и глубина экспериментальных разработок и клинической апробации новых препаратов.

Цель и задачи исследований. Разработать, провести экспериментальную оценку и клинико-биохимическое изучение препаратов на основе циминаля. Сформулировать теоретические и методологические принципы получения ветеринарных лекарственных средств на основе циминаля и внедрить их в ветеринарную практику

В соответствии с поставленной целью решены следующие задачи:

- научно обосновать необходимость применения субстанции циминаль в различных областях ветеринарии;

- разработать новые химиотерапевтические средства на основе циминаля;

- дать фармако-токсикологическую характеристику разработанных препаратов;

- обосновать безопасность применения препаратов циминаля;

- разработать показания к применению новых препаратов и провести их клинические испытания;

- подготовить нормативно-техническую документацию на новые препараты.

Научная новизна. Теоретически и экспериментально обоснованно использование циминаля в качестве субстанции для разработки новых ветеринарных лекарственных средств. Изучены фармакологические свойства и определены параметры токсичности циминаля. Установлено, что субстанция относится к IV классу опасности, имеет слабо выраженные кумулятивные свойства, эмбриотоксическое, тератогенное, мутагенное, раздражающее и аллергенное действия отсутствуют.

Впервые на основе циминаля разработан ряд лекарственных форм, представляющих собой сложные многокомпонентные системы, состоящие из активных и дополнительных ингредиентов, обеспечивающих, в совокупности, высокую терапевтическую эффективность и изучены основные фармако-токсикологические свойства разработанных лекарственных средств. Установлено, что новые препараты относятся к малотоксичным соединениям, не обладают кумулятивным эффектом, аллергенными и сенсибилизирующими свойствами, не оказывают отрицательного влияния на воспроизводительную функцию животных.

Показано, что препараты циминаля при применении их больным животным оказывают нормализующее влияние на морфологические и иммунологические показатели крови, интенсивность течения процессов свободнорадикального окисления липидов, состояние антиоксидантной системы и иммунного статуса.

Даны фармакокинетические характеристики и оценено влияние разработанных лекарственных средств на морфологические и биохимические показатели крови, неспецифическую резистентность организма животных. Научно аргументировано, экспериментально и клинически доказана перспективность использования этих препаратов в ветеринарной медицине. Разработаны максимально допустимые уровни содержания циминаля в продукции животного происхождения и определены сроки ожидания. Научная новизна исследований подтверждена патентом.

Практическая значимость и реализация результатов исследований. Обоснована перспективность использования циминаля в качестве субстанции. На основании результатов исследований разработаны технические условия и ТР, регламентирующие технологический процесс производства препаратов: циминаль (ТУ У «24.4.31293151.035-03); палочки внутриматочные с циминалем (ТУ У 24.4-31293151-042-2004); цидисепт раствор для инъекций (ТУ У 24.4.31293151.041:2005); цидисепт-аэро (ТУ У 24.4.31293151.029:2005) и цидисепт-гель (ТУ У 24.4.31293151.030:2005, СТО 10590965-0004-2006). Департаментом ветеринарной медицины Министерства аграрной политики Украины утверждены временное наставление по применению – циминаля и палочек внутриматочных с циминалем (протокол № 8 от 1.09.2003). Департаментом ветеринарной медицины Министерства аграрной политики Украины зарегистрированы препараты - цидисепт раствор для инъекций (№ 1863-02-672-06 от 31.05.2006.), цидисепт-аэро (№ 2033-02-719-06 от 06.10.2006) и цидисепт-гель (№ 1743-02-640-06 от 04.05.2006). Инструкция по применению цидисепт-геля, утверждена заместителем руководителя Россельхознадзора РФ за № ПВР-2-1.6/01688 от 11.12. 2006 г.

Широкие производственные испытания цидисепта-о разрешены Главным государственным ветеринарным инспектором Воронежской области (Временное наставление на цидисепт-о от 11.01.2005). Нормативно-техническая документация на препарат цидисепт-о представлена на регистрацию в Федеральную службу ветеринарного и фитосанитарного надзора РФ.

Материалы диссертации вошли в Методические рекомендации: «Токсикологический контроль кормов и кормовых добавок» (Львов, 1999), «Установление мутагенности средств защиты животных» (Киев, 2003) и Отраслевой стандарт Украины. «Препараты ветеринарные. Методы изучения безвредности» (Киев, 2003).

Апробация работы. Основные результаты исследований представлены на заседаниях Ветфармсовета Украины (Львов, 2003, 2006); методической комиссии ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (Москва, протокол №1 от 25.01.2006 года); международных научно-практических конференциях «Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных» (Воронеж, 2004); «Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных» (Воронеж, 2005); «Актуальные проблемы токсикологии. Безопасность жизнедеятельности людей» (Киев, 2005); международной научно-производственной конференции, посвящённой 100-летию со дня рождения профессора Авророва А.А.(Воронеж, 2006); междунар. науч.- практ. конф., посвящ. 65-летию Ульяновской ГСХА (Ульяновск, 2008); «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Курск, 2008); «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел» (Москва, 2008); «Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных» (Воронеж, 2009), ІІ международном конгрессе специалистов ветеринарной медицины (Киев, 2004), VI Национальном съезде фармацевтов Украины (Харьков, 2005) и V национальном съезде фармацевтов Украины (Харьков, 1999), на 1 съезде фармакологов России (Воронеж, 2007).

Публикации. Основные материалы диссертации изложены в 40 статьях, опубликованных в различных изданиях, в том числе 7 в журналах, рекомендованных ВАК РФ («Ветеринария и кормление», «Ветеринария», «Ветеринарный врач», «Аграрный вестник Урала»), 2 Методических рекомендациях, 1 Отраслевом стандарте Украины, 1 монографии.

Основные положения, выносимые на защиту.

- теоретическое и экспериментальное обоснование использования субстанции циминаль в составе новых ветеринарных лекарственных средств;

- разработка новых химиотерапевтических средств на основе циминаля;

- фармако-токсикологические свойства циминаля и лекарственных средств на его основе;

- влияние разработанных препаратов на клиническое состояние, морфологические и биохимические показатели крови и неспецифическую резис-тентность организма больных животных, полученных на основе циминаля;

- изучение остаточных количеств препаратов на основе циминаля в продуктах животноводства и установление периодов их выведения;

- эффективность применения ветеринарных лекарственных средств на основе циминаля в клинической практике.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 330 страницах и включает введение, обзор литературы, материал, объем и методы исследований, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы, предложения, список литературы и приложения. Диссертационная работа проиллюстрирована 86 таблицами и 46 рисунками. Список литературы включает 510 источников, в том числе 154 на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛ, ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 1995-2008 г.г. в отделе клинической биохимии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН в соответствии с планом научно-исследовательских работ по заданию 08.04.01. «Разработать методы ранней диагностики, эффективные средства и способы профилактики и лечения массовых незаразных и вызываемых условно-патогенными микроорганизмами заболеваний у молодняка высокопродуктивных животных» (№ гос. рег. 15070.3666026906.06.8.001.2), программа фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации Россельхозакадемии на 2001-2005 и 2006-2010 г.г.

В проведении ряда исследований принимали участие сотрудники ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии Л.В. Ческидова, А.В. Топольницкая, М.Ю. Нижегородов, А.А. Михайлов, А.Л. Индюков, А.Г. Шахов, Ю.Н. Бригадиров, Л.Ю. Сашнина, С.М. Сулейманов, В.И. Шушлебин, Ю.Н. Алёхин, сотрудники «Зооветеринарного центра» Курило Н.Ф., Гребенщиков В.Е., Галкин А.В. и другие, которым автор выражает искреннюю признательность за оказанную помощь и плодотворное сотрудничество.

Лабораторные и опытные образцы препаратов на основе циминаля изготовлены в ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии и «Зооветеринарном центре»(г.Харькова, Украина).

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствие с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учета результатов (Фролов И.Т., 1965). Перед экспериментом животные выдерживались в течение 2 недель в карантинных условиях на стандартном пищевом рационе (И.П. Западнюк с соавт., 1983). Для опыта животных брали в эксперимент после внутригрупповой адаптации. Доступ к воде и корму был свободным, световой режим естественным.

В проведении экспериментальных и научно-производственных работ использовали: самцов и самок мышей белых беспородных и линейных СВА с массой тела 20,0±3,0 г (n=3500); самцов и самок белых крыс беспородных и линии Wistar с массой тела 180,0±25,0 г (n=750); 4 – морские свинки (n=340); кроликов разного пола породы шиншилла с массой тела от 1,1 до 2,5 кг (n=120); телят черно-пестрой породы (n=180); коров симментальской породы (n=100); свиней крупной белой породы и помесей разного возраста и пола (n=800); 8 – цыплят-бройлеров кросса Арбор Айкерс (n>60000). Подробнее схемы опытов и дозировки препаратов представлены в соответствующих разделах диссертации.

Острую и хроническую токсичность оценивали в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР (1991), аллергенную в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке аллергенных свойств фармакологических средств» (1988), эмбриотоксическую и тератогенную активность в соответствии с «Методическими рекомендациями по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств» (1997), мутагенную активность препаратов оценивали в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке мутагенности новых лекарственных средств»(1994) и иммунотоксические свойства в соответствии с «Методическими рекомендациями по изучению иммуномодулирующих свойств фармакологических средств» (1992).

Изучение антимикробной активности циминаля и препаратов на его основе в опытах in vitro проводились методом серийных разведений (Антонов В.И. с соавт., 1986; Ковалев В.Ф. с соавт., 1988; Сидоров М.А. с соавт., 1995). В качестве тест-культур использовали референтные и полевые (патогенные) штаммы микроорганизмов - возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят, типированных по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и серологическим свойствам.

Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) изучаемых препаратов определяли методом серийных разведений в мясо-пептонном бульоне (МПБ); минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) – путем высева из пробирок с прозрачной средой на плотные питательные среды (МПА), не содержащие препарат. В качестве жидкой питательной среды применяли мясо-пептонный бульон. При определении чувствительности стрептококков к среде добавляли 1% глюкозы. Содержание микробных клеток в одном мл среды составляло 500 тысяч. Посевы инкубировали при 37оС в течение 18-24 часов. По истечении срока инкубации учитывали результат.

Изучение острой токсичности препаратов проводили общепринятыми методами (М.П. Беленький, 1963; И.В. Саноцкий, 1970; О.Н. Елизарова, 1971) на белых мышах и белых крысах. Препараты применяли внутрь, внутримышечно, подкожно. Группы животных формировали по принципу парных аналогов по массе тела, развития и клинического состояния. Перед началом опытов животных выдерживали на карантине в течение 12 дней, а перед введением препарата не кормили в течение 12 часов. После введения препаратов за опытными животными вели непрерывное наблюдение на протяжении первого дня. В последующем состояние животных отмечали дважды в сутки в течение 14 дней. Регистрировали общий статус и поведение животных, состояние нервно-мышечных и вегетативных функций, шерстного покрова, поедание корма, потребление воды и времени наступления токсикоза и гибели. Среднелетальную дозу - LD50 - определяли аналитическим способом Спирмена-Кербера (Лакин Г.Ф., 1990) и с помощью пробит-анализа с использованием прикладной программы «Статистика +2003». Величины LD16 и LD84 препаратов для белых мышей и белых крыс определяли графически на основании соответствующих пробитов и доз в мг/кг массы тела, показатель ошибки средней дозы эффекта - SLD50 - аналитически и графически.

Хроническую токсичность препаратов на основе циминаля изучали на белых крысах и мышах при длительном накожном, парентеральном и аэрозольном введении. Общетоксическое действие препарата оценивали по динамике массы тела животных при взвешивании 1 раз в неделю, гематологическим показателям крови и состоянию системы гемостаза – при исследовании крови у крыс 1 раз в 10 дней и через неделю восстановительного периода. Для исследования внутренних органов животных (тимус, печень, почки, легкие, сердце, селезенка, надпочечники) часть грызунов из каждой группы подвергали эвтаназии в те же сроки исследования (В.М. Гацура, 1974).

Вегетативный статус оценивали по состоянию слизистых, шерстного покрова, ширины глазных щелей, наличию саливации, диареи, опрятности животных.

Для выявления возможного токсического действия препарата на организм животных на 10, 20 и 30 сутки от начала опыта на 10 мышах каждой группы проводили определение детоксицирующей функции печени с помощью гексеналовой пробы (С.В. Сперанский, 1980). Гексенал вводили внутрибрюшинно в дозе 60,0 мг/кг массы тела в виде 0,2% водного раствора. Тест проводили в условиях тишины и теплового комфорта (230С). Эффект гексенала оценивали по длительности утраты гравитационного рефлекса (бокового положения головы). В эти же сроки на других 10 мышах каждой группы изучали общекомпенсаторные реакции организма с помощью функциональной пробы плаванием (В.И. Гацура, 1974).

Влияние препаратов на моторно-эвакуаторные функции желудка и кишечника изучали на самцах белых крыс (160-210 г) - по 6 крыс на группу. Во всех экспериментах препараты вводили животным внутрижелудочно за 1 час до постановки тестов. контрольным животным вводили физиологический раствор (В.С. Бузлама с соавт., 2007).

Тест на эвакуаторную функцию желудка проводили на крысах-самцах методом Brodie. Для этого крысам после 18-часового голодания (с исключением копрафагии) в желудок вводили по 1 мл 35% суспензии сульфата бария на 15% водном растворе ПВП. Через 18 минут после введения индикатора животных умерщвляли, извлекали желудок, его содержимое смывали на предварительно взвешенный фильтр и после высушивания его до постоянного веса определяли массу остатка. По разнице между введенным количеством индикатора и остатком оценивали моторно-эвакуаторную функцию желудка.

Тест проводили по той же методике. Индикатор вводили внутрь в дозе 1мл. Убой животных проводили через 18 минут после введения индикатора. Извлекали кишечник. Измеряли расстояние от пилоруса до переднего фронта индикатора и длину всего кишечника. Величину транзита определяли по процентному соотношению первой длины ко второй. Кроме этого взвешивали содержимое слепой и толстой кишок.

Раздражающее действие изученных препаратов на кожу изучали в опытах на кроликах. Площадь нанесения составляла для кроликов 80-82 см2 (5% от общей поверхности тела животных). За два дня до эксперимента тщательно выстригали шерсть на спине, избегая механических повреждений кожных покровов. Экспозиция препаратов составляла 4 часа, после чего кожу аккуратно протирали ватным тампоном, смоченным дистиллированной водой. Реакцию кожи на воздействие препаратов оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения.

Учитывали функциональные нарушения кожи, характеризующиеся появлением различной степени выраженности эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменением температуры. Оценку раздражающего действия препарата проводили по балльной системе.

Для изучения влияния циминаля и препаратов на его основе на глаз кролика в конъюнктивальный мешок левого глаза закапывали пипеткой по 2 капли подогретого до 37С препарата. Правый глаз у кроликов служил контролем, на него препарат не наносили.

Через 0,5, 1, 2, 3, 4, 5 и 6 часов после инстилляции препаратов учитывали клиническое состояние организма животных (температуру тела, частоту пульса, количество дыхательных движений), а также изменение кровенаполнения конъюнктивы, наличие лакримации и выделений, состояние роговицы и век.

Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия проведено по методике А.П. Шицковой с соавт. (1977) на самках белых крыс массой 220,020,0 г. Фазу полового цикла устанавливали путем исследования вагинального содержимого. Первым днем беременности считали день обнаружения спермиев после подсадки самцов к самкам. На 19-20 день беременности оценивали состояние матки, плацент и плодов, подсчитывали количество желтых тел беременности, оценивали равномерность расположения плодов в рогах матки. Раннюю и позднюю резорбцию, общую эмбриональную смертность, выживаемость подсчитывали по формулам, предложенным А.М. Малашенко и И.К. Егоровым (1977). В целях выявления патологии внутренних органов эмбрионов материал фиксировали в жидкости Боуэна и 70 спирте. Аномалии скелета выявляли по методу Даусона (1984). Критериями оценки эмбриотоксического и тератогенного действия препарата служили показатели гибели зародышей на пред- и постимплантационных стадиях развития (эмбриотоксический эффект), наличие аномалий развития внутренних органов и скелета (тератогенный эффект), уровень плодовитости, масса зародышей.

Исследование аллергенных свойств препаратов проводили путем постановки кожных реакций, конъюнктивальной пробы у сенсибилизированных морских свинок-аналогов массой тела 270-310 г, обоего пола, белого цвета или имеющих крупные белые пятна на боках туловища, а также путем постановки реакции дегрануляции тучных клеток (РДТК), используя белых крыс в соответствии с Методическими рекомендациями, разработанными в НИИ медицины труда АМН РФ по единой схеме постановки токсикоаллергических экспериментов.

Влияние препаратов на качество мясопродуктов проведено с использованием слепого метода по 9-ти бальной шкале для органолептической оценки качества вареного мяса и бульона разработанного ВНИИМП (1985).

Репаративные свойства препаратов изучены на моделях лоскутных кожных ран и ожогов. Нанесение ожоговой травмы, взятие биологического материала от экспериментальных животных проводили в соответствии с существующими требованиями проведения экспериментов на животных. Исследования проводили на белых беспородных крысах массой от 180 до 200 г. Для воспроизведения лоскутной раны на боковой поверхности тела крысы удалялся шёрстный покров и участок кожи площадью 10×10 мм2.

Два дозированных симметричных ожога IIIA степени площадью по 300 мм2 наносили под хлороформным ингаляционным наркозом на обе стороны предварительно выбритой заднебоковой части тела с помощью специального приспособления при t =100С в течении 10 секунд. Общая площадь ожогов при этом составляла около 5% поверхности тела. Спустя 5, 10, 15, 20, 25, 30 дней рассчитывают индекс заживления раны (ожога).

Физическую нагрузку создавали методом плавания мышей в обезвоздушенной водопроводной воде при 20С. Мышам на корень хвоста закрепляли груз в 5 % от массы тела. Учитывали продолжительность плавания до полного утомления. Не допуская гибели, мышей извлекали из воды, высушивали, отогревали и при необходимости использовали для повторных нагрузок.

С целью характеристики общего состояния животных при проведении модельных опытов общепринятыми методами, описанными в соответствующих руководствах (В.Г. Предтеченский, 1964; И.П. Кондрахин с соавт., 1983; И.М. Карпуть, 1986) в крови определяли количество эритроцитов (1012/л); гемоглобина (г/л); СОЭ (мм/ч); лейкоцитов (109/л); тромбоцитов (109/л); концентрацию мочевины (мМ/л), фосфора (мМ/л), холестерина (мМ/л), глюкозы (мМ/л), креатинина (мМ/л), кальция (мМ/л), активность аспартат– и аланинаминотрасфераз (Ед/л), щелочной фосфатазы (Ед/л) и γ-глутамилтрансферазы (Ед/л) – на биохимическом анализаторе «Hitachi-902»; концентрацию общего белка (г/л), липидов (г/л) и билирубина (мкМ/л) наборами фирмы «Витал» (Санкт-Петербург); β-липопротеидов (мг%) турбодиметрическим методом (М. Ледвина, 1960); белковые фракции электрофорезом на агарозе (Ю.Б. Филиппович с соавт., 1975); содержание каротина и витамина А в яйце (Л.И. Войтов с соавт., 1989). Определение содержания средних молекул, сорбционную способность эритроцитов проводили по Ю.Н. Алехину и др. (2000-2007).

Характеристику системы пероксидное окисление липидов - антиоксидантная защита (ПОЛ-АОЗ) у животных проводили по показателям: содержание в крови конъюгированных диенов (D233 /мг липидов) и кетодиенов (D278 /мг липидов) определяли спектpoфoтoметpически в гептановой фазе липидного экстракта крови, содержание (мкМ/л) малонового диальдегида – по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (В.С. Бузлама с соавт., 1997); содержание в сыворотке крови флуоресцирующих оснований Шиффа в усл.ед./мл сыворотки на спектроколориметре «Спекол-10» с флуоресцентной приставкой при длине волны возбуждения 365 нм и испускания – 435-440 нм. За 1 условную единицу принимали интенсивность флуоресценции раствора хинин-сульфата с концентрацией 1 мкг/мл в 0,1 Н серной кислоте (W.R. Bidlack, A.L. Tappel, 1973; V.G. Malshet, A.L. Tappel, 1973); содержание в сыворотке крови витамина Е в мкМ/л (Р.Ш. Кисилевич, С.И. Скварко, 1972). Для повышения чувствительности метода вместо 2,2-дипиридила использовали батофенантролин (I.D. Desai, F.E. Martinez, 1986); активность глутатионпероксидазы (К.Ф. 1.11.1.9.) в крови с использованием в качестве субстрата гидроперекиси изопропилбензола (Г.О. Кругликова, И.М. Штутман, 1976). Активность фермента выражали в мМ восстановленного глутатиона/л.мин; активность глутатионредуктазы (К.Ф. 1.6.4.2.) в крови в мМ окисленного глутатиона/л.мин; (Г.О. Кругликова, И.М. Штутман, 1976); активность каталазы по способности перекиси водорода образовывать с молибдатом аммония стойкий окрашенный комплекс с максимумом поглощения при 410 нм (М.А. Королюк, 1988).

Для характеристики состояния гуморального звена неспецифической иммунологической резистентности организма определяли: бактерицидную активность (%) сыворотки крови (О.В. Смирнова, Т.А. Кузьмина, 1966); лизоцимную активность (мкг/мл) сыворотки крови (О.В. Бухарин, Н.В. Васильев, 1974); комплементарную активность (% гемолиза) сыворотки крови (Г.Ф. Вагнер, 1966); содержание суммарных иммуноглобулинов (отн.ед.) в сыворотке крови с помощью цинк-сульфатного теста (М.А. Воловенко, 1975).

Определение остаточного содержания циминаля в органах, тканях и биологических жидкостях проводили спектрофотометрическим методом, измеряя оптическую плотность полученных растворов при длине волны 313 нм.

Терапевтическую эффективность применения препаратов на основе циминаля определяли по снижению заболеваемости и падежа, повышению сохранности животных, их продуктивности, воспроизводительных показателей и качества животноводческой продукции. Клиническое наблюдение за опытными животными и диагностические исследования проведены совместно с ветеринарными специалистами.

Статистическая обработка результатов проведена с пользованием пакетов прикладных программ «Microsoft Excel», «Statistica 5.0» на PC «Pentium III». Достоверность отличий оценивали методом парных сравнений, используя t-критерий Стъюдента (Г.Ф. Лакин, 1990).


3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Антимикробная активность циминаля

Изучение антимикробной активности циминаля в опытах in vitro показало, что соединение обладает выраженными антимикробными свойствами. Бактериостатическая концентрация для кокковой микрофлоры составила 3,9 - 15,6 мкг/мл. Активность препарата в отношении как музейных, так и полевых штаммов эшерихий была достаточно высокой – 7,8 – 32,25 мкг/мл. Минимальное ингибирующее действие циминаля в отношении музейных и полевых штаммов сальмонелл установлено в концентрации 6,25-15,6 мкг/мл. Активность препарата в отношении пастерелл также была высокой – 7,8-15,6 мкг/мл, proteus vulgaris и вordetella bronchisepticа – 15,6 мкг/мл. Бактерицидное действие циминаля в отношении изученных культур превышало бактериостатическое - в 2 раза.

3.2. Острая токсичность циминаля

При определении острой токсичности установлено, что ЛД50 циминаля при пероральном способе введения белым мышам и белым крысам равна соответственно 12280,2 и 12417,7 мг/кг массы тела, а при подкожном введении соответственно – 3188,6 и 4055,1 мг/кг (табл. 1). Эти данные позволяют отнести циминаль к IV классу опасности – малоопасным веществам (ГОСТ 12.1.007-76).

Таблица 1

Параметры острой токсичности циминаля при однократном
внутрижелудочном и подкожном введении для лабораторных животных (мг/кг)

Вид

животных

Параметры токсичности

SLD50

МПД

LD16

LD50

LD84

LD100

внутрижелудочное введение

Белые мыши

9000,0

10168,0

12280,2

(11400-13100)

14513,3

15599,6

±424,5

Белые крысы

8500,0

10552,3

12417,7

(11400-13400)

14329,3

15273,6

±479,6

подкожное введение

Белые мыши

1500,0

1913,0

3188,6

(2780-3600)

4449,7

5083,9

±204,0

Белые крысы

2000,0

2862,4

4055,1

(3670-4430)

5247,8

5844,1

±190,6

3.3. Хроническая токсичность циминаля

Многократное пероральное введение циминаля в дозах 248,0 мг/кг (1/50 ЛД50), 621,0 мг/кг (1/20 ЛД50) и 1242,0 мг/кг (1/10 LD50) и подкожное – в дозах 81,0 мг/кг (1/50 ЛД50), 203,0 мг/кг (1/20 ЛД50) и 406,0 мг/кг (1/10 LD50) не вызывало существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, груминг, аппетит, частота дыхания крыс. Случаев гибели подопытных животных не было установлено.

Результаты изучения хронической токсичности циминаля при разных способах введения в опытах на лабораторных животных показали, что неблагоприятное влияние циминаля на организм крыс носит дозозависимый характер. Двадцатиоднодневное введение циминаля в дозах 248,0 мг/кг (пероральное) и 81,0 мг/кг (подкожное) не вызывает функциональных изменений в организме крыс, следовательно, эти дозы можно считать недействующими. Опытные крысы, которым применяли циминаль в дозах 621,0 и 203,0 мг/кг не отличались от контрольных по приросту массы тела и относительной массе внутренних органов, но у них отмечена тенденция повышения в сыворотке крови активности ферментов печени, а также повышения количества лейкоцитов, что указывает на первые признаки токсического действия циминаля. Следовательно, данные дозы можно считать пороговыми.

Хроническая интоксикация в максимальных дозах 1242,0 и 406,0 мг/кг (1/10 от ЛД50) сопровождается снижением массы тела, увеличением относительной массы почек и, главным образом, печени. Относительная масса по-



Рис. 1. Влияние циминаля на относительную массу печени и почек в дозах 1242,0 (внутрь) и 406,0 мг/кг (подкожно)

чек через 21 день при подкожном введении увеличивается на 24,9%, а при пероральном - на 17,7%. Относительная масса печени на 21 день при пероральном введении была увеличена на 24,8%, а при подкожном - это увеличение было более значительным – 32,4%. Дозы 1242,0 и 406,0 мг/кг способствовали снижению количества эритроцитов на 9,4 и 18,7%, гемоглобина на 7,2 и 18,7%, тромбоци-

тов на 13,7 и 24,5% и увеличению лейкоцитов на 9,3 и 13,2% по отношению к контролю.

На фоне применения препарата в максимальных дозах (1/10 от LD50,) наиболее характерные изменения произошли в биохимических показателях крови, характеризующих функциональное состояние печени и почек (табл. 2 и 3).

К окончанию опыта (21 день), у крыс данной группы повысился уровень альбуминов на 10,2 и 37,3%, мочевины - на 18,8 и 45,4%, креатинина – на 33,8 и 34,1%, активность ЩФ, АлАТ, АсАТ – на 33,9 и 44,7; 16,9 и 24,1, 24,6 и 36,2 % соответственно и уровень билирубина на 31,6 и 44,7%. Однако среднее значение этих показателей у крыс опытной группы не выходило за верхние границы нормы для данного вида животных.

Через 10 дней после последнего введения препарата, данные показатели у опытных животных практически восстанавливались до физиологических значений.

Таблица 2

Биохимические показатели крови белых крыс при многократном (21 день) пероральном применении циминаля

Показатели

Контроль

Дозы циминаля, мг/кг

248,0

621,0

1242,0

Общий белок, г/л

68,7±1,50

68,5±1,26

69,4±1,90

71,5±1,58

Альбумины, г/л

32,4±2,11

29,9±1,31

31,1±1,63

35,7±1,08

Мочевина, мМ/л

5,05±0,25

4,92±0,39

5,71±0,41

6,00±0,24*

Глюкоза, мМ/л

5,02±0,37

4,65±0,41

5,12±0,99

5,40±0,32

Холестерин, мМ/л

3,08±0,40

2,99±0,18

2,84±0,31

2,81±0,12

АсАТ, Ед/л

77,9±3,06

79,9±5,15

87,6±7,18

97,1±7,83*

АлАТ, Ед/л

46,7±2,66

45,7±2,27

51,0±3,17

54,6±2,19*

Креатинин, мкМ/л

40,0±5,02

41,9±3,39

44,7±4,07

53,5±3,16*

ЩФ, Ед/л

88,0±7,11

90,7±5,48

110,9±10,6

122,6±7,26*

Билирубин, мкМ/л

3,67±0,36

3,12±0,24

3,32±0,19

4,83±0,31*

* - Р < 0,05 - 0,001 по сравнению с контролем

Таблица 3

Биохимические показатели крови белых крыс при многократном (21 день) подкожном введении циминаля

Показатели

Контроль

Дозы циминаля, мг/кг

81,0

203,0

406,0

Общий белок, г/л

69,5±1,76

70,4±1,17

71,3±0,85

75,5±1,79*

Альбумины, г/л

29,2±1,17

29,7±1,98

31,9±0,78

40,1±2,18*

Мочевина, мМ/л

4,76±0,25

4,69±0,38

4,70±0,20

6,92±0,65*

Глюкоза, мМ/л

3,86±0,23

3,75±0,23

3,80±0,51

4,40±0,18

Холестерин, мМ/л

1,38±0,21

1,32±0,09

1,43±0,12

1,51±0,15

АсАТ, Ед/л

106,9±3,54

109,1±9,21

121,2±10,2

145,6±5,19*

АлАТ, Ед/л

26,5±2,05

25,9±1,19

30,9±6,10

32,9±3,65

Креатинин, мкМ/л

32,0±1,08

31,2±1,20

34,2±2,11

42,9±4,52*

ЩФ, Ед/л

107,3±9,05

109,0±7,15

133,0±10,1

155,3±11,1*

Билирубин, мкМ/л

2,19±0,18

2,31±0,30

2,51±0,22

3,17±0,20*

* - Р < 0,05 - 0,001 по сравнению с контролем

Результаты проведения гексеналовой пробы показали, что введение циминаля в наивысших дозах на протяжении 21 дня не оказывало существенного влияния на обезвреживающую функцию печени, продолжительность медикаментозного сна животных не отличалась от контрольной группы во все сроки исследования.

3.4. Изучение субхронической токсичности на сельскохозяйственных животных

При изучении субхронической токсичности циминаля в опыте на поросятах при пероральном введении в смеси с кормом в условно-терапевтической дозе 1,5 мг/кг, в пять и десять раз ее превышающей (7,5 и 15,0 мг/кг) и при подкожном введении в условно-терапевтической дозе 0,3 мг/кг, в пять и десять раз ее превышающей (1,5 и 3,0 мг/кг) в течение 20 дней не оказывало существенного влияния на клинический статус, поведение и аппетит поросят. В период всего опыта поросята контрольной и опытных групп были подвижны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не установлено. Препарат в различных дозах не снижал скорости роста поросят.
  1   2   3   4   5   6   7

Похожие:

Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля iconПрограмма-минимум кандидатского экзамена по специальности 14. 00. 25 «Фармакология, клиническая фармакология» по медицинским, биологическим и фармацевтическим наукам
В основу настоящей программы положены следующие дисциплины: фармакология, клиническая фармакология и фармакотерапия
Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля iconВетеринарный контроль за остаточными количествами лекарственных средств в продукции животноводства на примере препаратов на основе циминаля [Текст] / С. В
Ветеринарный контроль за остаточными количествами лекарственных средств в продукции животноводства на примере препаратов на основе...
Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля iconЛитература Клиническая фармакология: Национальное руководство
Учебно-методическое и информационное обеспечение дисциплины клиническая фармакология
Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля icon11. Информация о съездах, симпозиумах и конференциях
Редакционная коллегия информирует авторов, что журнал «Экспериментальная и клиническая фармакология» принимает к рассмотрению рукописи...
Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля iconПояснительная записка Клиническая фармакология является дисциплиной по выбору студента, устанавливаемой вузом (опд. В. 02). Эта дисциплина содержательно дополняет дисциплину специального уровня обучения «Ветеринарная и клиническая фармакология.
Опд. В. 02. Эта дисциплина содержательно дополняет дисциплину специального уровня обучения «Ветеринарная и клиническая фармакология....
Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля iconЭ. Фаррингтон. Гомеопатическая клиническая фармакология Сверка текста произведена по изданию: г. Киев / Запорожье. 1992 г. Isbn 5-7707-3191 Проф. Эрнст
Сверка текста произведена по изданию: г. Киев / Запорожье. 1992 г. Isbn 5-7707-3191 Проф. Эрнст Фаррингтон гомеопатическая клиническая...
Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля iconСравнительная клиническая фармакология современных ингибиторов протонной помпы
Ведущая организация: гоу впо московский государственный медико-стоматологический университет
Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля iconУчебно-методический комплекс дисциплина «Экспериментальная и клиническая биология»
Федеральное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования
Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля iconКукес В. Г. Клиническая фармакология: Учебник для медицинских вузов
Статус дисциплины: Дисциплина входит в цикл общих математических и естественнонаучных дисциплин, региональный компонент (ЕН. Р)....
Экспериментальная и клиническая фармакология препаратов на основе циминаля iconСамостоятельная работа 106
«Ветеринария» и примерной программы дисциплины «Ветеринарная и клиническая фармакология. Токсикология», утвержденной от 12. 02. 2001....
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©lib.znate.ru 2014
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница