Методические рекомендации




НазваниеМетодические рекомендации
страница3/7
Дата10.12.2012
Размер0.98 Mb.
ТипМетодические рекомендации
1   2   3   4   5   6   7

Рис. 2. Схема идентификации неферментирующих


грамотрицательных бактерий


Первый этап - определение родовой принадлежности НГОБ (табл. 3) - включает три теста:

определение подвижности, окисление 1-процентной глюкозы в среде Хью - Лейфсона (OF) и

наличие фермента оксидазы. По результатам этих трех тестов проводят ориентировочную

идентификацию следующих НГОБ: Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella, Alcaligenes, Flavobacterium

meningosepticum.


Таблица 3


ОРИЕНТИРОВОЧНАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ НЕФЕРМЕНТИРУЮЩИХ


ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ


------------------T-----------T------------T---------------------¬


¦ Микроорганизмы  ¦ Подвижность ¦   Оксидаза  ¦ Окисление-ферментация ¦


¦                  ¦            ¦             ¦ глюкозы на среде OF ¦


+-----------------+-----------+------------+---------------------+


¦ Pseudomonas spp  ¦ +          ¦ + (-)       ¦ +/-; -/-*            ¦


¦ Acinetobacter spp ¦ -          ¦ -           ¦ +/-; -/-*            ¦


¦ Moraxella spp    ¦ -          ¦ +           ¦ -/-                  ¦


¦ Alcaligenes spp  ¦ +          ¦ +           ¦ -/-*                 ¦


¦ Flavobacterium   ¦ -          ¦ +           ¦ +/-                  ¦


¦ meningosepticum  ¦            ¦             ¦                      ¦


L-----------------+-----------+------------+----------------------


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.


    Примечание: 1) в числителе - окисление; в знаменателе -

ферментация.


                2) "*" - подщелачивание среды OF в аэробных условиях.


                3) "(-)" - редко встречаемый признак.


Причем разделение родов Pseudomonas и Alcaligenes возможно в том случае, если исследуемый

штамм окисляет глюкоза на среде OF (см. табл. 3).


Второй этап - определение видовой, а в отдельных случаях подтверждение родовой

принадлежности НГОБ (табл. 4). Выбор тестов, которые необходимо поставить на втором этапе,

зависит от результатов трех тестов первого этапа.


Таблица 4


ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ТЕСТЫ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ


НЕФЕРМЕНТИРУЮЩИХ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ


---------------------T-------T-----T------T---------T-----T----T---T-

---T----T------T-------T-----T-------T-------T---¬


¦ Микроор-       /    ¦ Подвиж- ¦ Окси- ¦ OF с  ¦ Флюорес- ¦ Жела- ¦ Рост ¦ H

S ¦ Ами- ¦ ДНК- ¦ Лизин- ¦ Фенил- ¦ OF с ¦ Окисле- ¦ Чувст- ¦ Ин- ¦


¦ ганизмы      /      ¦ ность  ¦ даза ¦ глюко- ¦ ценция в ¦ тина- ¦ при ¦ 2

¦ лаза ¦ аза ¦ декар- ¦ аланин- ¦ фрук- ¦ ние    ¦ витель- ¦ дол ¦


¦            /        ¦        ¦      ¦ зой   ¦ УФ-свете ¦ за   ¦ 42  ¦   

¦     ¦     ¦ бокси- ¦ дезами- ¦ тозой ¦ 10-про- ¦ ность к ¦    ¦


¦          /          ¦        ¦      ¦ (окис- ¦ либо ар- ¦      ¦ °С  ¦   

¦     ¦     ¦ лаза  ¦ наза   ¦      ¦ центной ¦ пени-  ¦    ¦


¦        /            ¦        ¦      ¦ ление) ¦ гининде- ¦      ¦     ¦   

¦     ¦     ¦       ¦        ¦      ¦ лактозы ¦ циллину ¦    ¦


¦      /         Тесты ¦        ¦      ¦       ¦ гидродаза ¦      ¦     ¦   

¦     ¦     ¦       ¦        ¦      ¦        ¦        ¦    ¦


+--------------------+-------+-----+------+---------+-----+----+---+-

---+----+------+-------+-----+-------+-------+---+


¦ P. aeruginosa       ¦ +      ¦ +    ¦ +     ¦ +        ¦ +    ¦ +   ¦ -  ¦ -

   ¦ -   ¦ -     ¦ -      ¦ -    ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ P. fluorescens      ¦ +      ¦ +    ¦ +     ¦ +        ¦ +    ¦ -   ¦ -  ¦ -

   ¦ -   ¦ -     ¦ -      ¦ +    ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ P. putida           ¦ +      ¦ +    ¦ +     ¦ +        ¦ -    ¦ -   ¦ -  ¦ -


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.


   ¦ -   ¦ -     ¦ -      ¦ +    ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ P. cepacia          ¦ +      ¦ +    ¦ +     ¦ -        ¦ -    ¦ -   ¦ -  ¦ -

   ¦ -   ¦ +     ¦ -      ¦ +    ¦ +      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ P. stutzeri         ¦ +      ¦ +    ¦ +     ¦ -        ¦ -    ¦ -   ¦ - 

¦ +   ¦ -   ¦ -     ¦ -      ¦ +    ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ P. putrefaciens     ¦ +      ¦ +    ¦ +     ¦ -        ¦ +    ¦ -   ¦ +  ¦ -

   ¦ +   ¦ -     ¦ -      ¦ +/-  ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ P. maltophilia      ¦ +      ¦ -    ¦ +/-   ¦ -        ¦ +    ¦ -   ¦ -  ¦ -

   ¦ +   ¦ +/-   ¦ -      ¦ +    ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ P. diminuta         ¦ +      ¦ +    ¦ -     ¦ -        ¦ +    ¦ -   ¦ -  ¦ -

   ¦ +   ¦ -     ¦ -      ¦ -    ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ P. alcaligenes      ¦ +      ¦ +    ¦ -*    ¦ -        ¦ -    ¦ -   ¦ -  ¦ -

   ¦ -   ¦ -     ¦ -      ¦ -    ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ P. pseudoalcaligenes ¦ +      ¦ +    ¦ + сл  ¦ -        ¦ -    ¦ +   ¦ -  ¦ -

   ¦ -   ¦ -     ¦ -      ¦ +    ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ Alcaligenes spp.    ¦ +      ¦ +    ¦ -*    ¦ -        ¦ -    ¦ +/- ¦ -  ¦ -

   ¦ -   ¦ -     ¦ -      ¦ -    ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ Moraxella spp.      ¦ -      ¦ +    ¦ -     ¦ -        ¦ +/-  ¦ -   ¦ -  ¦ -

   ¦ -   ¦ -     ¦ -/+    ¦ -    ¦ -      ¦ +      ¦ -  ¦


¦ Acinetobacter       ¦        ¦      ¦       ¦          ¦      ¦     ¦   

¦     ¦     ¦       ¦        ¦      ¦        ¦        ¦    ¦


¦ calcoaceticus var.  ¦        ¦      ¦       ¦          ¦      ¦     ¦   

¦     ¦     ¦       ¦        ¦      ¦        ¦        ¦    ¦


¦ anitratum           ¦ -      ¦ -    ¦ +     ¦ -        ¦ +/-  ¦ +   ¦ -  ¦ -

   ¦ -   ¦ -     ¦ -      ¦ +    ¦ +      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ Acinetobacter       ¦        ¦      ¦       ¦          ¦      ¦     ¦   

¦     ¦     ¦       ¦        ¦      ¦        ¦        ¦    ¦


¦ calcoaceticus var.  ¦        ¦      ¦       ¦          ¦      ¦     ¦   

¦     ¦     ¦       ¦        ¦      ¦        ¦        ¦    ¦


¦ lwoffi              ¦ -      ¦ -    ¦ -*    ¦ -        ¦ -    ¦ -   ¦ -  ¦ -

   ¦ -   ¦ -     ¦ -      ¦ -    ¦ -      ¦ -      ¦ -  ¦


¦ Flavobacterium      ¦        ¦      ¦       ¦          ¦      ¦     ¦   

¦     ¦     ¦       ¦        ¦      ¦        ¦        ¦    ¦


¦ meningosepticum     ¦ -      ¦ +    ¦ +     ¦ -        ¦ +    ¦ -   ¦ +/-

¦ +/- ¦ +   ¦ -     ¦ -      ¦ +    ¦ +      ¦ -      ¦ +  ¦


L--------------------+-------+-----+------+---------+-----+----+---+-

---+----+------+-------+-----+-------+-------+----


Примечание: "*" - подщелачивание среды OF.


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.


Оценку результатов первого этапа проводят в следующем порядке: определение подвижности,

наличия фермента оксидазы, окисления 1-процентной глюкозы на среде Хью - Лейфсона (среда OF).

Как видно из рис. 2, возможны семь вариантов исходов этих трех тестов.


1. Неподвижные микроорганизмы, не обладающие оксидазной активностью и не окисляющие

глюкозу на среде OF (на схеме: подвижность -, оксидаза -, OF -), относят к Acinetobacter calcoaceticus v.

lwoffi. В качестве подтверждающего используют тест с 10-процентной лактозой. A. lwoffi не окисляют

10-процентной лактозу.


2. Неподвижные НГОБ, не обладающие оксидазной активностью, но окисляющие глюкозу на

среде OF (на схеме: подвижность -, оксидаза -, OF +), принадлежат к Acinetobacter calcoaceticus v.

anitratus.


Для подтверждения используют тест окисления 10-процентной лактозы, который у этих

микроорганизмов положительный. Для идентификации Acinetobacter большое значение имеет

микроскопия мазка, поскольку среди неферментирующих грамотрицательных бактерий только

Acinetobacter могут иметь клетки в виде кокков или коккобацилл.


3. Штаммы, обладающие следующими свойствами: подвижность (-), оксидаза (+), OF (-),

относят к роду Moraxella. Подтверждающим тестом для этих микроорганизмов служит

чувствительность к пенициллину (+).


4. Неподвижные оксидазоположительные штаммы, окисляющие глюкозу на среде OF, относят к

Flavobacterium meningosepticum. В качестве подтверждающего теста служит положительная реакция на

индол и наличие желтого пигмента.


    5.  Подвижные  оксидазоположительные микроорганизмы, окисляющие

глюкозу


на  среде  OF  (+),  могут  принадлежать  к  одному  из  шести 

видов  рода


Pseudomonas:  P.  aeruginosa,  P.  fluorescens,  P.  putida, P.

cepacia, P.


slutzeri,  P. putrifaciens. Для их дифференциации одновременно ставят

шесть


тестов:    флюоресценция    в    УФ-свете    либо    определение   

наличия


аргининдегидролазы,     определение     наличия     желатиназы,   

амилазы,


лизиндекарбоксилазы,  рост  при  42  °С,  образование H S. Учет

результатов


                                                       2


начинают  с  определения  аргининдегидролазы либо флюоресценции в УФ-

свете.


Штаммы,  обладающие  аргининдегидролазой  либо флюоресцирующие в УФ-

свете и


дающие  рост при 42 °С, относят к P. aeruginosa. Если исследуемый

штамм при


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.


наличии  аргининдегидролазы  или  флюоресценции в УФ-свете не растет

при 42


°С,   проводят   дифференциацию   между  P.  putida  и  P. 

fluorescens  по


желатиназной  активности.  Не  разжижающие  желатину  штаммы 

относят  к P.


putida,  а  разжижающие  -  к  P.  fluorescens.  Если у исследуемого

штамма


отсутствует  аргининдегидролаза  либо  флюоресценция  в УФ-свете,

оценивают


способность  образовывать  сероводород, амилазу и

лизиндекарбоксилазу. Если


аргининдегидролаза  или  флюоресценция  (-),  а H S (+), штамм

относят к P.


                                                 2


putrefaciens;  штамм, обладающий ферментом амилазой - к P. stutzeri;

штамм,


декарбоксилирующий  лизин,  расценивают  как  P.  cepacia  Среди

культур P.


putrefaciens  встречаются  штаммы, окисляющие глюкозу и не окисляющие

ее, а


среди культур P. cepacia - оксидазоположительные и

оксидазоотрицательные.


6. Подвижные, оксидазоположительные, не окисляющие глюкозу на среде OF, не

ферментирующие грамотрицательные бактерии могут принадлежать к роду Alcaligenes или к одному

из видов рода Preudomonas: P. alcaligenes, P. putrefaciens, P. pseudoalcaligenes, P. diminuta. Обычно эти

микроорганизмы подщелачивают среду OF в аэробных условиях. Для их дифференциации

одновременно ставят четыре теста и определяют окисление фруктозы на среде OF, наличие ДНКазы,

фенилаланиндезаминазы и образование сероводорода. Окисление фруктозы указывает на P.

pseudoalcaligenes, образование сероводорода является четким дифференциальным признаком для P.

putrefaciens. Наличие фермента ДНКазы определяет вид P. diminuta. Проведение точной

дифференциации между родом Alcaligenes и видом P. alcaligenes возможно лишь по окраске жгутиков,

что неприемлемо для практических лабораторий. Поэтому для ориентировочной дифференциации

используют тест, определяющий фенилаланиндезаминазу. Этот фермент присутствует в 72% случаев

у P. alcaligenes и отсутствует у бактерий рода Alcaligenes.


7. Подвижные оксидазоотрицательные штаммы, окисляющие глюкозу на среде OF, принадлежат

либо к P. maltofilia, либо к виду P. cepacia. Для дифференциации этих двух видов используют тест,

выявляющий наличие фермента ДНКазы: P. maltofilia обладает ферментом ДНКазой, а P. cepatia - нет.

Среди штаммов P. maltofilia встречаются штаммы как окисляющие, так и не окисляющие глюкозу.


4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ


Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.


МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКАМ


Метод дисков


Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам методом дисков определяется в

соответствии с "Методическими указаниями по определению антибиотикочувствительности

микроорганизмов к антибиотикам методом их диффузии в агар с использованием дисков", утв. МЗ

СССР.


Метод реплик


Чистые культуры идентифицированных микроорганизмов засевают короткими штрихами на

секторы чашки с мясопептонным агаром (из расчета 12 штрихов на 1/6 чашки), подращивают 5 - 6

часов и перепечатывают бархатным или металлическим репликатором на среды с антибиотиками:

ампициллином, карбенициллином, рифампицином, кефзолом, цефализином (100 мкг/мл среды),

левомицетином, канамицином, налидиксовой кислотой (50 мкг/мл среды), стрептомицином (20

мкг/мл среды), тетрациклином (30 мкг/мл среды), гентамицином (5 мкг/мл среды), а также с одним из

сульфаниламидов на минимальном солевом агаре (50 - 100 мкг/мл среды). Учет результатов

проводится через сутки инкубации при 37 °С и позволяет определить антибиотикограмму, служащую

одновременно маркером штамма. При этом устойчивость к налидиксовой кислоте служит важной

генетической меткой при сравнении идентифицированных культур, а к гентамицину может считаться

достаточно надежным признаком, характерным для госпитальных штаммов.


5. ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ


И ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ПО ЭПИДПОКАЗАНИЯМ


Исследуемый материал от контактных лиц по эпидпоказаниям отбирается по усмотрению

эпидемиолога.


Определение E. coli


Отбор проб производят согласно разделу 2. Выделение E. coli осуществляется в соответствии с

Приказом N 720 МЗ СССР, 31.07.78.

1   2   3   4   5   6   7

Похожие:

Методические рекомендации iconМетодические рекомендации по подготовке районов размещения населения, материальных и культурных ценностей, подлежащих эвакуации (далее Методические рекомендации),
Методические рекомендации предназначены для местных органов управления по делам гочс, глав администраций муниципальных образований,...
Методические рекомендации iconМетодические рекомендации Москва 2012 Методические рекомендации «Медико-педагогический контроль за организацией занятий физической культурой обучающихся с отклонениями в состоянии здоровья»
Методические рекомендации предназначены для руководителей, медицинских работников и педагогов физической культуры общеобразовательных...
Методические рекомендации iconМетодические рекомендации по самостоятельной работе студентов 12 5 методические рекомендации по выполнению индивидуальных заданий 12
Методические рекомендации по выполнению курсового проекта
Методические рекомендации iconМетодические рекомендации г. Волгоград 2011 Организация трудовой деятельности молодых инвалидов. Методические рекомендации. Волгоград.
Методические рекомендации предназначены для психологов, медицинских работников, специалистов по социальной работе, специалистов учреждений...
Методические рекомендации iconМетодические рекомендации разработаны в развитие действующей в России гигиенической классификации пестицидов (Методические рекомендации по оценке степени опасности пестицидов.
Методические рекомендации предназначены для экспертов-специалистов медико-биологического профиля, работающих в научных учреждениях...
Методические рекомендации iconМетодические рекомендации по проведению межевания объектов землеустройства
Настоящие Методические рекомендации по проведению межевания объектов землеустройства (далее Методические рекомендации) разработаны...
Методические рекомендации iconМетодические рекомендации по самостоятельной работе студентов
Тематический план изучения дисциплины (методические рекомендации преподавателю и студенту)
Методические рекомендации iconМетодические рекомендации по организации цеховых и межцеховых оздоровительных
Методические рекомендации предназначены для руководителей промышленных предприятий
Методические рекомендации iconУнификация текстов управленческих документов методические рекомендации
Методические рекомендации рассчитаны на работников аппарата управления и специалистов
Методические рекомендации iconМетодические рекомендации к написанию образовательных программ
Методические рекомендации к составлению общеобразовательной программы дошкольного образовательного учреждения
Разместите кнопку на своём сайте:
Библиотека


База данных защищена авторским правом ©lib.znate.ru 2014
обратиться к администрации
Библиотека
Главная страница